反相色谱（RPC）是一种液相色谱技术，它利用非极性的固定相和极性有机溶剂的水溶液作为流动相，根据溶质的极性差异进行分离和纯化。在RPC中，溶质通过疏水性相互作用被固定相表面吸附，而流动相中的极性溶剂则有助于将溶质从固定相上洗脱下来。
固定相：
通常由硅胶等表面键合有非极性分子层（如C18、C8、C2）的填料组成，表现出强烈的疏水性。
流动相：
由极性有机溶剂（如甲醇、乙腈）或其水溶液组成，用于洗脱溶质。
分离原理：
溶质在固定相上的分配系数取决于其疏水性，疏水性越强，分配系数越大。
应用范围：
RPC广泛应用于相对分子质量低于5000，尤其是1000以下的非极性小分子物质的分析与纯化，也适用于蛋白质等生物大分子的分离。
注意事项：
由于生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活，因此在以回收生物活性蛋白质为目的时，需要选择合适类型的反相介质。
反相色谱因其高效、灵活和广泛的应用，是现代液相色谱中非常重要的一种分离技术