细胞转染是一种将外源分子(如DNA、RNA)导入真核细胞的技术,广泛应用于分子生物学和细胞生物学研究中。通过转染,研究人员可以将特定的基因、siRNA、shRNA或其他核酸分子导入细胞,以研究这些分子在细胞内的功能、表达及其对细胞行为的影响。
主要特点和应用:
外源分子导入:将DNA、RNA等导入细胞内。
载体使用:常见的载体包括病毒、质粒、重组DNA技术等。
转染类型:
瞬时转染:基因在细胞中短暂表达,通常持续数小时至数天。
稳转转染:基因在细胞中稳定表达,通常需要筛选过程。
应用领域:基因功能分析、蛋白质生产、基因治疗研究、药物筛选等。
常用转染方法:
化学转染:使用阳离子脂质体、磷酸钙沉淀等方法。
物理转染:如基因微注射、激光介导转染等。
实验步骤:
细胞铺板与分组:
选择合适的细胞系,进行细胞培养并分组。
制备转染复合物:
将外源核酸与转染试剂混合形成复合物。
转染至细胞中:
将转染复合物加入到细胞培养基中。
内部化与释放内含物:
转染复合物进入细胞并释放外源核酸。
效应检测:
通过不同的实验方法检测转染效果,如荧光标记、PCR、Western blot等。
细胞转染是实验室中一个基础且重要的技术,对于理解基因表达调控、进行基因治疗研究等方面具有极其重要的作用