FISH技术,全称为荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization),是一种分子生物学技术,用于检测细胞或组织样本中的特定DNA序列。以下是FISH技术的基本原理和应用:
基本原理
探针设计:
使用一段已知序列的DNA或RNA探针,该探针通常带有荧光标记,如绿色荧光蛋白(GFP)或其他荧光染料。
杂交过程:
将标记的探针与待检测的细胞或组织样本进行杂交。在适宜的条件下(如高温变性、低温退火和适中温度复性),探针与样本中的互补DNA序列结合形成杂交体。
信号检测:
通过荧光显微镜观察,可以直接看到标记的探针在细胞核或特定DNA序列上的位置、大小及数量,从而判断目标DNA序列的缺失、扩增、易位等异常情况。
应用
肿瘤诊断与治疗:
FISH技术用于检测肿瘤组织中的基因异常,如基因扩增、重排、缺失和融合,对疾病的诊断、鉴别诊断、预后评估及指导用药至关重要。
遗传学研究:
在遗传学领域,FISH技术用于研究染色体结构和功能,以及基因在染色体上的定位。
细胞遗传学检测:
FISH技术是分子检测和染色体核型分析之间的桥梁,能够在不破坏细胞结构的情况下进行检测。
优点
快速:检测过程相对快速,可以在短时间内得到结果。
安全:不使用放射性同位素,对操作人员和环境较为安全。
准确:具有高特异性和高灵敏度,能够准确定位特定的基因序列。
直观:通过荧光显微镜直接观察,结果易于判断。
示例应用
乳腺癌治疗:FISH技术可以检测HER2基因的扩增状态,指导是否使用靶向药物如赫赛汀。
染色体异常检测:在血液肿瘤的诊断分型中,FISH技术具有明显优势。
FISH技术因其独特的优势,在医学研究和临床诊断中发挥着重要作用