cDNA,全称为 互补DNA(complementary DNA),是一种 具有与mRNA链互补的碱基序列的单链DNA。它是以mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的。cDNA是通过逆转录过程得到的,具体步骤如下:
逆转录:
以mRNA为模板,在RNA依赖的DNA聚合酶(如逆转录酶)的作用下,合成一条与mRNA序列互补的单链DNA,即cDNA。
去除RNA:
合成单链cDNA后,通过碱处理除去与其对应的RNA。
合成双链DNA:
以单链cDNA为模板,通过DNA依赖的DNA聚合酶或RNA依赖的DNA聚合酶的作用,合成另一条与其互补的单链DNA,最终形成双链cDNA。
cDNA的主要特点是它不包含基因组DNA中的内含子序列,而只包含外显子序列。这使得cDNA在遗传工程、基因表达检测等领域具有广泛的应用价值。例如,在基因克隆过程中,cDNA可以作为基因的插入片段,避免了基因组DNA中内含子对克隆和表达的影响。