tunnel染色方法
问题描述
- 精选答案
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1.常规方法制作石蜡切片，用二甲苯浸洗2次，每次5min;
2.用梯度乙醇(100、95、90、80、70%)各浸洗1次，每次3min;
4.加入含2%过氧化氙的PBS，室温反应5min，PBS漂洗2次
5.制备TUNEL反应混合液，处理组用50ulTdT450ul荧光素标计的dUTP液混匀:而阴性对照
6,玻片干后，用滤纸小心吸去切片周围多余液体，加50ulTUNEL反应混合液(阴性对照组仅加50ul荧光素标记的dUTP液)于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃*1h。
7.加入到已预热37℃的洗涤与终止反应缓冲液；
37℃保温30min，PBS漂洗3次;
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Tunnel staining法是一种染色方法，它可以用于显示核仁的细胞结构。它的工作原理是将核仁的蛋白质染色，然后将其固定在样本上，再将其通过电子显微镜观察，从而获得核仁细胞结构的详细图像。
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tunnel 的凋亡染色并不是专门去染细胞核，但它可以使细胞核着色。 TUNEL全名为terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling汉语为：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。原理：细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3’末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’末端，从而可进行凋亡细胞的检测。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3’末端形成，很少能够被染色。
TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用.
