为什么在引物的5端添加酶切位点

问题描述

精选答案

在引物的5端添加酶切位点一般是为了方便PCR产物的克隆和定向克隆。

通过添加酶切位点，可以在PCR产物两端引入该酶切位点，从而方便克隆到目的载体上。同时，酶切位点也可以帮助避免不需要的连接或者连接反向的情况，用于执行定向克隆时也同样十分便利。酶切位点的选择一般根据需要克隆的目的载体来确定，如果需要在目的载体中特定的酶切位点上精准克隆，则需要在引物设计中考虑到，选用嵌入这个酶切位点的引物；如果仅是需要方便克隆，则可以引入常用的一些酶切位点，比如EcoRI, HindIII, BamHI等等。需要注意的是引物的长度，以引入酶切位点后的合理长度为宜。

其他回答

说教育

DNA合成，新链的延伸方向是5→3

因此，需要在5端加上酶切位点

酶切位点可以上网查

同时，记得再加上一些保护碱基

因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来

保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查

那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列

其他回答

安娜老师

不是随意添加。

酶切位点都加在引物的5‘端。

这样在第一轮扩增后，就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）。

在接下来的扩增中每个产物就都会有了。

PCR的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对。

但是随着扩增的进行，产物都有这些位点后，就不存在不匹配的问题了