如何设计elisa

问题描述

精选答案

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗原或抗体的实验技术。

设计ELISA的步骤如下：

1. 选择包被抗原/抗体：首先，根据你的研究目标选择合适的包被抗原或抗体。这将是捕获目标分析物的物质。

2. 包被微孔板：将选定的包被抗原/抗体以适当浓度稀释后，加入到预涂有活化剂的微孔板中，并让其在室温下孵育一段时间，以便抗原/抗体与微孔板结合。

3. 封闭非特异性结合位点：用封闭液冲洗微孔板，以减少非特异性结合。

4. 加入样本和生物素标记的二抗：将待测样本（如血清、细胞裂解液等）加入到微孔板中，同时加入与目标分析物特异性结合的生物素标记的二抗。在室温下孵育一段时间后，用洗涤液冲洗微孔板。

5. 加入亲和素-HRP：向微孔板中加入亲和素-HRP，它将与生物素标记的二抗结合。在室温下孵育一段时间后，用洗涤液冲洗微孔板。

6. 显色反应：向微孔板中加入底物溶液（如TMB），使HRP催化底物产生有色产物。在适当的温度和时间下进行显色反应。

7. 终止反应和光度测定：用终止液中止显色反应，然后用酶标仪测量各孔的光密度值。通过比较标准品和样本的光密度值，可以确定样本中目标分析物的浓度。